Plasmide Double Nickase (h) CLN2: sc-405204-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CLN2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CLN2 Double Nickase (h) et le plasmide CLN2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TPP1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CLN2 Antibody (G-3): sc-393961
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CLN2 | sc-405204-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CLN2 | sc-405204-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TPP1 code la protéase lysosomale à sérine tripeptidyl‑peptidase 1 (CLN2), qui enlève des tripeptides N‑terminaux des polypeptides afin de soutenir le renouvellement des protéines lysosomales et la protéostasie cellulaire. La fonction de CLN2 s’intègre au trafic endo‑lysosomal, aux voies autophagie–lysosome et au traitement catabolique des substrats destinés à la dégradation. La perte ou le dysfonctionnement de TPP1 perturbe l’homéostasie lysosomale, favorise l’accumulation de matériel non dégradé et compromet la résilience des neurones et des cellules gliales dans des modèles de biologie des maladies de surcharge lysosomale. En conséquence, TPP1/CLN2 est largement utilisé comme point d’entrée mécanistique pour étudier les voies d’élimination dépendantes du lysosome et les réponses de stress cellulaire pertinentes pour les maladies.
CLN2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TPP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TPP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TPP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TPP1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.