Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
CLIP-170 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425158
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- CLIP-170 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico CLIP-170, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CLIP-170 Anticuerpo (F-3): sc-28325
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
CLIP-170 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-425158 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Clip1 codifica CLIP-170, una proteína que se localiza en el extremo plus de los microtúbulos y que conecta las puntas dinámicas de los microtúbulos con sitios corticales y orgánulos para coordinar el transporte intracelular y la arquitectura celular. CLIP-170 participa en la regulación de la polimerización de microtúbulos, en el acoplamiento cinetocoro–microtúbulo durante la mitosis y en el tráfico de complejos vesiculares y proteicos mediante interacciones con dineína/dinactina y otras redes de +TIP. A través de estas funciones, Clip1 contribuye a procesos como la polarización celular, la migración y la organización del huso mitótico, que con frecuencia se ven alterados en contextos proliferativos y del neurodesarrollo. Las alteraciones en la dinámica de los microtúbulos y en la fidelidad de la segregación cromosómica asociadas a vías dependientes de CLIP-170 son relevantes para estudiar mecanismos vinculados a la inestabilidad genómica y la disfunción del citoesqueleto en modelos de enfermedad.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO CLIP-170 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Clip1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Clip1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Clip1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CLIP-170.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Clip1 para la investigación de la señalización de CLIP-170, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Clip1 críticos para la función de CLIP-170
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Clip1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido CLIP-170 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CLIP-170 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Clip1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CLIP-170 (m) y el plásmido HDR CLIP-170 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Clip1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Clip1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.