Plásmido CRISPR de Activación (h) CLIC2: sc-409129-ACT

CLIC2 (canal intracelular de cloruro 2) es un miembro de la familia CLIC implicado en la conductancia intracelular de cloruro y en una asociación a membrana sensible al estado redox, lo que contribuye a la homeostasis iónica a través de los compartimentos del sistema endomembranoso. Se ha vinculado a la regulación de la liberación de Ca²⁺ dependiente del receptor de rianodina y a dinámicas más amplias de señalización del calcio que influyen en la excitabilidad, la secreción y las respuestas al estrés. En tejidos humanos, la expresión de CLIC2 está enriquecida en contextos cardiovasculares y neuronales, en consonancia con funciones en la fisiología muscular y neuronal. Las alteraciones en la función o la expresión de CLIC2 se han asociado con fenotipos del neurodesarrollo y disfunción cardíaca, lo que lo hace relevante para estudios mecanísticos de la regulación de canales iónicos y de redes de señalización.

CLIC2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CLIC2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CLIC2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CLIC2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CLIC2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CLIC2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CLIC2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CLIC2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CLIC2 en células tumorales con expresión de CLIC2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.