CLEC-2D Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-412035

Descripción general

CLEC2D codifica CLEC-2D, un ligando de tipo lectina C (tipo II, transmembrana) que modula la vigilancia inmunitaria al unirse al receptor inhibidor KLRB1/CD161 en células NK y en subpoblaciones de linfocitos T. A través de este eje, CLEC-2D puede moldear la función efectora citotóxica, la producción de citocinas y la comunicación célula–célula en las interfaces entre el sistema inmune y los tejidos. La expresión de CLEC2D se regula de manera dinámica por el estrés celular y los estados de diferenciación, lo que la vincula con vías que gobiernan la evasión inmunitaria, la inflamación y las interacciones entre tumor e inmunidad. Se ha descrito señalización desregulada de CLEC2D en múltiples neoplasias y contextos inflamatorios, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico para estudiar la regulación de células NK/T en sistemas humanos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CLEC-2D (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CLEC2D en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CLEC2D junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CLEC2D tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CLEC-2D.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CLEC2D para la investigación de la señalización de CLEC-2D, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CLEC2D críticos para la función de CLEC-2D
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CLEC2D para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CLEC-2D CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CLEC-2D CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CLEC2D. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CLEC-2D (h) y el plásmido HDR CLEC-2D (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CLEC2D para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CLEC2D definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.