CLC-6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405938

Descripción general

CLCN6 codifica el intercambiador intracelular de cloruro/protones CLC-6, miembro de la familia CLC que se localiza predominantemente en las membranas endosomales y lisosomales, donde contribuye a la homeostasis iónica de las vesículas. Al acoplar el transporte de cloruro a gradientes de protones, CLC-6 está implicado en la regulación de la maduración de los endosomas, la acidificación lisosomal y los procesos de tráfico de membranas que influyen en la clasificación y el recambio de proteínas. La alteración de estas vías puede modificar la fisiología de las células neuronales y epiteliales, y la variación genética en CLCN6 se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y con una disfunción más amplia relacionada con los lisosomas en estudios en humanos. En consecuencia, CLCN6 se investiga con frecuencia en el contexto de la biología endolisosomal, el reciclaje de carga y las respuestas al estrés celular vinculadas a cambios en el pH de los orgánulos y en el equilibrio iónico.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CLC-6 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CLCN6 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CLCN6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CLCN6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CLC-6.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CLCN6 para la investigación de la señalización de CLC-6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CLCN6 críticos para la función de CLC-6
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CLCN6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CLC-6 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CLC-6 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CLCN6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CLC-6 (h) y el plásmido HDR CLC-6 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CLCN6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CLCN6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.