Plásmido Doble Nickase (h) Clathrin Heavy Chain/CLTC: sc-400863-NIC

CLTC codifica la cadena pesada de clatrina, un componente estructural central de las fosas y vesículas recubiertas de clatrina que media la internalización de receptores y el tráfico de membranas entre la membrana plasmática, los endosomas y la red trans-Golgi. Al ensamblarse en redes poliédricas junto con proteínas adaptadoras, CLTC coordina la selección de carga y la gemación de vesículas, sosteniendo la endocitosis, el reciclaje de vesículas sinápticas y el recambio regulado de receptores de señalización. Estos procesos se entrecruzan con vías que controlan la señalización por factores de crecimiento, la captación de nutrientes y la homeostasis de los orgánulos. La desregulación del transporte mediado por clatrina se ha vinculado con alteraciones en la señalización de receptores y con reordenamientos genómicos que implican a CLTC en ciertas neoplasias, lo que convierte a CLTC en un nodo útil para estudiar fenotipos dependientes del tráfico en células humanas.

Clathrin Heavy Chain/CLTC El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CLTC en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CLTC. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CLTC. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CLTC alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.