Plasmide CRISPR d'Activation (h) CKR-1: sc-402247-ACT

CCR1 (CKR-1) code un récepteur de chimiokines de la famille des GPCR qui se lie à des chimiokines CC telles que CCL3, CCL5 et CCL7 afin d’orienter la chimiotaxie des leucocytes et leur trafic tissulaire. Après liaison du ligand, CKR-1 active une signalisation via des protéines G hétérotrimériques qui module les flux de calcium intracellulaire, la signalisation MAPK et les voies dépendantes de la PI3K, coordonnant l’adhésion, la migration et les programmes de gènes inflammatoires. L’activité de CCR1 façonne le recrutement des cellules immunitaires au sein des microenvironnements inflammatoires et s’articule avec des réseaux de cytokines et de chimiokines qui influencent la dynamique des compartiments myéloïde et lymphoïde. Une signalisation CCR1 dérégulée a été associée dans la littérature à des affections inflammatoires chroniques et à l’infiltration immunitaire associée aux tumeurs, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la migration immunitaire et du dialogue avec le microenvironnement.

CKR-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CCR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CKR-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CCR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CCR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CKR-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CCR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CKR-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CKR-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CCR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.