Plásmido Doble Nickase (m) citrin: sc-424510-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)citrin consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa citrin (m) y el plásmido de doble nickasa citrin (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Slc25a13. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: citrin Anticuerpo (D-7): sc-393303
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) citrin | sc-424510-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) citrin | sc-424510-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen murino *Slc25a13* codifica citrina, un transportador mitocondrial de aspartato–glutamato ubicado en la membrana interna que respalda la lanzadera malato–aspartato y vincula el equilibrio redox citosólico y mitocondrial con el metabolismo intermediario. Al intercambiar aspartato y glutamato a través de la membrana interna, la citrina ayuda a coordinar el metabolismo de aminoácidos, el manejo del nitrógeno ligado al ciclo de la urea y el flujo gluconeogénico mediante la disponibilidad de aspartato. La alteración de la función de SLC25A13 se asocia con fenotipos de desregulación metabólica en sistemas modelo, lo que convierte a *Slc25a13* en un nodo útil para estudiar el transporte mitocondrial, el metabolismo energético de los hepatocitos y la homeostasis sistémica de nutrientes. En ratones, la perturbación del transporte dependiente de citrina ofrece un enfoque manejable para analizar vías que acoplan la actividad de transportadores mitocondriales con el estado redox y el metabolismo del nitrógeno.
citrin El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Slc25a13 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Slc25a13. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Slc25a13. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Slc25a13 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.