Plasmide CRISPR d'Activation (h) CIS: sc-402619-ACT

Le gène humain **CISH** code la protéine **CIS** (cytokine-inducible SH2-containing protein), un adaptateur de la famille **SOCS** qui atténue la signalisation des récepteurs aux cytokines en se liant à des cibles phosphorylées et en favorisant leur dégradation via un renouvellement médié par l’ubiquitine. CIS agit comme régulateur de rétrocontrôle négatif des voies **JAK/STAT** en aval des récepteurs des cytokines de la famille **IL-2** et d’autres signaux immunomodulateurs apparentés, modulant l’activation, la prolifération et la différenciation des lymphocytes. Par son domaine **SH2** et sa **SOCS box**, CIS influence l’amplitude et la durée de la signalisation, en interaction avec des programmes plus larges de régulation de l’inflammation et de la croissance. Une expression dérégulée de **CISH** ou une activité anormale de CIS a été associée à une réponse immunitaire altérée et à la biologie des maladies inflammatoires, ce qui en fait un point d’entrée utile pour des études mécanistiques des réseaux de signalisation des cytokines.

CIS Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CISH sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CIS Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CISH dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CISH, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CIS. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CISH natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CIS au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CIS dans les cellules tumorales présentant une expression de CISH silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.