CIS Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402619-ACT

Il gene umano **CISH** codifica la proteina inducibile da citochine contenente un dominio SH2 (CIS), un adattatore della famiglia SOCS che attenua la segnalazione dei recettori delle citochine legandosi a bersagli fosforilati e promuovendone la degradazione mediata dall’ubiquitina. CIS agisce come regolatore di feedback negativo delle vie **JAK/STAT** a valle dei recettori per le citochine della famiglia **IL-2** e di segnali immunomodulatori correlati, modulando l’attivazione, la proliferazione e la differenziazione dei linfociti. Attraverso il suo dominio SH2 e il SOCS box, CIS influenza l’ampiezza e la durata del segnale, intersecando programmi più ampi di regolazione infiammatoria e della crescita. Un’espressione deregolata di CISH o un’alterazione dell’attività di CIS è stata associata a una risposta immunitaria modificata e alla biologia delle malattie infiammatorie, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici delle reti di segnalazione delle citochine.

CIS Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CISH senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CIS Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CISH nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CISH, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CIS. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CISH nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CIS nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CIS nelle cellule tumorali con espressione di CISH silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.