Plásmido CRISPR de Activación (h) CIS: sc-402619-ACT

El CISH humano codifica la proteína con dominio SH2 inducible por citocinas (CIS), un adaptador de la familia SOCS que atenúa la señalización de los receptores de citocinas al unirse a dianas fosforiladas y promover su recambio mediado por ubiquitina. CIS actúa como un regulador de retroalimentación negativa de las vías JAK/STAT aguas abajo de los receptores de citocinas de la familia de IL-2 y de señales inmunomoduladoras relacionadas, modulando la activación, proliferación y diferenciación de los linfocitos. A través de su dominio SH2 y su caja SOCS, CIS influye en la amplitud y la duración de la señalización, que se entrecruza con programas más amplios de regulación inflamatoria y del crecimiento. La expresión desregulada de CISH o la actividad de CIS se han vinculado con cambios en la capacidad de respuesta inmunitaria y con la biología de enfermedades inflamatorias, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de redes de señalización por citocinas.

CIS El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CISH sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CIS El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CISH en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CISH, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CIS. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CISH y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CIS en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CIS en células tumorales con expresión de CISH silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.