Plásmido Doble Nickase (h) Cingulin: sc-404409-NIC

CGN codifica la cingulina, una proteína de andamiaje citoplasmática concentrada en las uniones estrechas, donde enlaza componentes de unión transmembrana con el citoesqueleto cortical de actina. La cingulina coordina la formación y el mantenimiento de la barrera epitelial modulando el ensamblaje de las uniones, la polaridad celular y la organización del citoesqueleto, y se conecta con vías de señalización que regulan la tensión en las uniones y la actividad de las GTPasas de la familia Rho. A través de estas funciones, CGN influye en la permeabilidad paracelular y la homeostasis tisular en epitelios y endotelios polarizados. La alteración de la arquitectura de las uniones estrechas y de las redes reguladoras asociadas a la cingulina se investiga con frecuencia en contextos de disfunción de la barrera, inflamación y remodelado epitelial relevantes para fenotipos complejos de enfermedad.

Cingulin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CGN en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CGN. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CGN. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CGN alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.