Partículas Lentivirales de Activación (m2) CIITA: sc-419390-LAC-2

El gen Ciita del ratón codifica el transactivador del complejo mayor de histocompatibilidad de clase II (CIITA), un regulador maestro que no se une al ADN y que coordina la transcripción de los genes del MHC de clase II y de factores accesorios de presentación de antígeno mediante interacciones con el enhanceosoma RFX, NF-Y y CREB/ATF. La actividad de CIITA controla la presentación de antígeno inducible en células presentadoras de antígeno profesionales y puede ser estimulada por señales de citocinas como el IFN-γ, conectando las señales de la inmunidad innata con las respuestas adaptativas de linfocitos T CD4+. La función desregulada de Ciita/CIITA se asocia con una expresión alterada del MHC de clase II y con fenotipos inmunitarios relevantes para la infección, la autoinmunidad y la vigilancia inmunitaria antitumoral en modelos murinos. La edición del gen Ciita y los estudios de perturbación centrados en CIITA respaldan la investigación mecanística de las vías de presentación de antígeno, el control epigenético de la transcripción de genes inmunitarios y los cribados de genómica funcional en inmunología e inflamación.

Las partículas de activación lentiviral CIITA (m2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Ciita en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral CIITA (m2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Ciita, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de CIITA. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Ciita y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.