Plasmide Double Nickase (h) CIITA: sc-401762-NIC

CIITA (transactivateur du complexe majeur d’histocompatibilité de classe II) est un régulateur maître de l’expression des gènes du CMH de classe II dans les cellules présentatrices d’antigènes, coordonnant la transcription des loci HLA-DP, HLA-DQ et HLA-DR. Agissant comme un coactivateur ne se liant pas à l’ADN, CIITA intègre des signaux provenant de l’interféron-γ et d’autres voies inflammatoires afin d’assembler des enhanceosomes avec des facteurs tels que RFX et NF-Y, et de recruter la machinerie de modification de la chromatine. En contrôlant les programmes de traitement et de présentation des antigènes, CIITA module l’amorçage des lymphocytes T CD4+ et la surveillance immunitaire, et une activité altérée de CIITA a été associée à une dysrégulation immunitaire et à l’échappement immunitaire des tumeurs. Les réseaux transcriptionnels dépendants de CIITA, lorsqu’ils sont dérégulés, sont également étudiés dans le contexte de phénotypes inflammatoires et auto-immuns ainsi que des interactions hôte–pathogène.

CIITA Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CIITA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CIITA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CIITA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CIITA.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.