Plasmide Double Nickase (h) ChREBP: sc-401803-NIC

MLXIPL code pour la carbohydrate response element–binding protein (ChREBP), un facteur de transcription sensible au glucose qui couple la disponibilité en glucides à l’expression de gènes lipogéniques et glycolytiques. En réponse aux signaux métaboliques, ChREBP coopère avec des cofacteurs tels que MLX pour réguler des promoteurs contenant des éléments de réponse aux glucides, reliant la détection des nutriments au contrôle transcriptionnel du métabolisme hépatique et adipeux. Cet axe régulateur contribue à des voies impliquées dans la lipogenèse de novo, la synthèse des triglycérides et l’homéostasie du glucose, associant l’activité de ChREBP au remodelage métabolique en conditions d’excès nutritionnel. Une signalisation MLXIPL/ChREBP dérégulée a été associée à l’insulinorésistance, à des phénotypes de stéatose hépatique et à des mécanismes plus larges de maladies cardiométaboliques, ce qui en fait un nœud pertinent pour l’étude des réseaux de gènes du métabolisme.

ChREBP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MLXIPL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MLXIPL. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MLXIPL. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MLXIPL.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.