ChREBP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401803-ACT

ヒトMLXIPLは、糖応答性エレメント結合タンパク質（ChREBP）をコードしており、ChREBPはグルコースを感知する転写因子です。ChREBPはMLXとヘテロ二量体を形成し、糖応答性エレメントに結合して、解糖系、新規脂肪合成（de novo lipogenesis）、およびトリグリセリド代謝に関与する遺伝子の発現を制御します。ChREBPの活性は栄養状態やホルモンシグナルによって調節され、肝臓・脂肪組織・膵島において、グルコース代謝からのシグナルを転写プログラムへと統合します。MLXIPL/ChREBPシグナルの破綻は、インスリン抵抗性、非アルコール性脂肪性肝疾患（NAFLD）、さらには脂質恒常性に関わるより広範な表現型で観察される代謝リモデリングと関連しています。栄養応答性転写の中核ノードとして、ChREBPは細胞のエネルギーバランス、レドックス状態、代謝フラックスへの影響の観点から広く研究されています。

ChREBP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MLXIPLの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ChREBP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MLXIPL 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMLXIPL転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ChREBPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMLXIPL遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるChREBP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMLXIPL発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるChREBP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。