ChREBP CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401803-ACT

Humanes **MLXIPL** kodiert das carbohydrate-responsive element-binding protein (**ChREBP**), einen glucose-sensitiven Transkriptionsfaktor, der mit **MLX** ein Heterodimer bildet und an Carbohydrate-Response-Elemente bindet, um Gene zu regulieren, die an der Glykolyse, der **de-novo-Lipogenese** und dem Triglyceridstoffwechsel beteiligt sind. Die ChREBP-Aktivität wird durch Nährstoff- und Hormonsignale moduliert und verknüpft Signale aus dem Glukosestoffwechsel mit Transkriptionsprogrammen in Leber, Fettgewebe und Pankreasinseln. Eine fehlregulierte MLXIPL/ChREBP-Signalgebung steht mit dem metabolischen Remodeling in Zusammenhang, das bei Insulinresistenz, nichtalkoholischer Fettlebererkrankung (NAFLD) sowie allgemeineren Phänotypen der Lipidhomöostase beobachtet wird. Als zentraler Knotenpunkt der nährstoffabhängigen Transkriptionsregulation wird ChREBP breit untersucht, insbesondere hinsichtlich seiner Effekte auf die zelluläre Energiebilanz, den Redoxzustand und metabolische Flussraten.

ChREBP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MLXIPL-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ChREBP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MLXIPL-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MLXIPL-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ChREBP-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MLXIPL-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ChREBP-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ChREBP-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MLXIPL-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.