Plásmido CRISPR de Activación (h) chordin: sc-404997-ACT

El gen humano **CHRD** codifica **chordin**, una glicoproteína secretada rica en cisteína que antagoniza la señalización de **BMP** al unirse a ligandos BMP en el espacio extracelular y limitar su interacción con los receptores. Al modular la actividad de la vía **BMP/TGF-β**, chordin ayuda a regular el patrón embrionario, la especificación mesodérmica y la morfogénesis tisular, con efectos posteriores sobre programas de transcripción mediados por **SMAD**. La expresión desregulada de **CHRD** o un antagonismo alterado de BMP se ha asociado con anomalas del desarrollo y con procesos de remodelación vinculados a enfermedades en los que los gradientes de BMP influyen en el destino celular, la diferenciación y la organización de la matriz extracelular. Por lo tanto, **CHRD** es relevante para estudios de la dinámica de señalización de morfógenos, el compromiso de linaje y la modulación dependiente del contexto de la vía BMP en células humanas.

chordin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CHRD sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

chordin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CHRD en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CHRD, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de chordin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CHRD y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de chordin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía chordin en células tumorales con expresión de CHRD silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.