CHMP6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406179

Descripción general

CHMP6 (proteína 6 del cuerpo multivesicular cargada) es un componente central de la maquinaria ESCRT-III que coordina la remodelación de la membrana endosomal y la biogénesis de cuerpos multivesiculares, lo que permite la clasificación de la carga y la degradación lisosomal. Mediante la escisión de membrana dependiente de ESCRT, CHMP6 ayuda a regular la atenuación de receptores, el tráfico relacionado con exosomas y, de forma más amplia, la proteostasis y la homeostasis de la señalización. Las alteraciones de la vía ESCRT se han relacionado con defectos en el tráfico endolisosomal, la citocinesis, la autofagia y la gemación viral, procesos que con frecuencia se encuentran alterados en el cáncer y la neurodegeneración. En consecuencia, CHMP6 se estudia de manera habitual por su contribución a los fenotipos de tráfico vesicular, la dinámica de la señalización de receptores y las respuestas al estrés asociadas a la disfunción endosomal.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CHMP6 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CHMP6 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CHMP6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CHMP6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CHMP6.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CHMP6 para la investigación de la señalización de CHMP6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CHMP6 críticos para la función de CHMP6
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CHMP6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CHMP6 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CHMP6 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CHMP6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CHMP6 (h) y el plásmido HDR CHMP6 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CHMP6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CHMP6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.