Plasmide Double Nickase (h) CHMP4B: sc-401802-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CHMP4B correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CHMP4B Double Nickase (h) et le plasmide CHMP4B Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CHMP4B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CHMP4B | sc-401802-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CHMP4B | sc-401802-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHMP4B (charged multivesicular body protein 4B) est un composant central du complexe ESCRT-III, qui pilote les événements de remodelage membranaire nécessaires au tri endosomal et à la biogenèse des corps multivésiculaires. En polymérisant sur les membranes et en se coordonnant avec l’activité ATPase de VPS4, CHMP4B favorise la séquestration du cargo, la formation de vésicules intraluminales et les étapes terminales de l’abscission cytokinétique, le reliant ainsi aux voies qui contrôlent la diminution des récepteurs et la scission membranaire. La fonction ESCRT dépendante de CHMP4B contribue également à la réparation de la membrane plasmique ainsi qu’à certains aspects de l’autophagie et de l’homéostasie lysosomale via le trafic endolysosomal. Des perturbations génétiques des composants d’ESCRT-III, dont CHMP4B, sont associées à des défauts de division cellulaire et de protéostasie, et ont été impliquées dans des contextes de maladies neurodégénératives et oculaires, ainsi que dans des altérations de la signalisation au sein de réseaux endocytaires pertinents pour le cancer.
CHMP4B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CHMP4B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CHMP4B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CHMP4B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CHMP4B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.