Plásmido Doble Nickase (h) ChemR23: sc-403033-NIC

CMKLR1 codifica ChemR23, un receptor acoplado a proteína G de clase A para el quimioatrayente chemerina (RARRES2) y ligandos lipídicos proresolutivos como la resolvina E1. La señalización de ChemR23 activa vías dependientes de Gi, que incluyen la inhibición de la adenilato ciclasa, la activación de MAPK/ERK, la movilización de Ca2+ intracelular y el tráfico mediado por β-arrestina, modulando la quimiotaxis de leucocitos y las respuestas de macrófagos y células dendríticas. En tejidos humanos, CMKLR1 contribuye a la detección de señales inflamatorias y a la homeostasis metabólica, vinculando el reclutamiento de células inmunitarias con la biología del tejido adiposo y la vasculatura. La actividad desregulada de CMKLR1/ChemR23 se ha asociado con trastornos inflamatorios y fenotipos cardiometabólicos, lo que lo hace relevante para estudios mecanísticos de la interacción entre inmunidad y metabolismo.

ChemR23 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CMKLR1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CMKLR1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CMKLR1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CMKLR1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.