CHD7 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-404017-LAC

CHD7 codifica a proteína 7 de ligação ao DNA helicase com cromodomínio (chromodomain helicase DNA-binding protein 7), um remodelador de cromatina dependente de ATP que reconhece marcas de histonas e regula o posicionamento de nucleossomos para controlar programas transcricionais durante o desenvolvimento e a especificação de linhagens celulares. Ela integra a sinalização epigenética com a acessibilidade de enhancers e promotores, influenciando processos como o desenvolvimento da crista neural, a neurogênese e a morfogênese de órgãos por meio de uma ampla modulação de redes de expressão gênica. A atividade de CHD7 se cruza com vias que governam a organização da cromatina, a transcrição mediada pela RNA polimerase II e decisões de destino celular. A desregulação da função de CHD7 está associada a distúrbios do desenvolvimento, incluindo a síndrome CHARGE, e é estudada no contexto de fenótipos neurodesenvolvimentais e congênitos.

As Partículas de Ativação Lentivirais CHD7 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de CHD7 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais CHD7 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição CHD7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de CHD7. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo CHD7 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.