CHD5 Lentiviral Activation Particles (h): sc-402429-LAC

Chromodomain-Helicase-DNA-bindendes Protein 5 (CHD5) ist ein ATP-abhängiger Chromatin-Remodeler, der die Positionierung von Nukleosomen sowie Transkriptionsprogramme reguliert, die mit neuronaler Differenzierung, Zellzykluskontrolle und Genomstabilität verknüpft sind. Als Mitglied der CHD-Familie verbindet CHD5 Chromatin-Remodeling mit epigenetischer Regulation, um DNA-Schadensantworten und die koordinierte Expression von Tumorsuppressor-Netzwerken zu beeinflussen, darunter Signalwege im Zusammenhang mit p53-Signalisierung und Seneszenz. Eine veränderte CHD5-Expression oder ein genomischer Verlust wurde bei mehreren Krebsarten beschrieben; zudem ist eine Fehlregulation mit neuroentwicklungsbezogenen Prozessen verbunden, was CHD5 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung chromatinzustandsabhängiger Genregulation macht. Diese Eigenschaften machen CHD5 zu einem Modellziel, um zu analysieren, wie Chromatin-Remodeling die Linienfestlegung und krankheitsrelevante Transkriptionsschaltkreise prägt.

CHD5 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente CHD5-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

CHD5 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der CHD5-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen CHD5-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen CHD5-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.