Plásmido CRISPR de Activación (h) CHD5: sc-402429-ACT

CHD5 (proteína 5 de unión al ADN con helicasa y dominio cromodominio) es un remodelador de cromatina dependiente de ATP, enriquecido en neuronas, de la familia SNF2, que coordina el posicionamiento de nucleosomas y los programas transcripcionales necesarios para la diferenciación y la estabilidad del genoma. A través de sus cromodominios y de su actividad helicasa/ATPasa, CHD5 modula la accesibilidad de la cromatina en elementos reguladores y se integra con vías epigenéticas que controlan la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la expresión génica específica de linaje. La reducción de la actividad de CHD5 se ha asociado con un control transcripcional alterado e inestabilidad cromosómica, y la expresión alterada de CHD5 se vincula con frecuencia a redes supresoras de tumores en el neuroblastoma y otras neoplasias malignas. En investigación biomédica, CHD5 se estudia ampliamente por sus funciones en la dinámica de la cromatina, el desarrollo neuronal y los mecanismos por los que la desregulación epigenética contribuye a fenotipos relevantes para la enfermedad.

CHD5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CHD5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CHD5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CHD5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CHD5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CHD5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CHD5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CHD5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CHD5 en células tumorales con expresión de CHD5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.