CHD5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402429-ACT

CHD5 (chromodomain-helicase-DNA-bindendes Protein 5) ist ein in Neuronen angereicherter, ATP-abhängiger Chromatin-Remodeler der SNF2-Familie, der die Positionierung von Nukleosomen sowie für Differenzierung und Genomstabilität erforderliche Transkriptionsprogramme koordiniert. Über seine Chromodomänen und seine Helikase-/ATPase-Aktivität moduliert CHD5 die Chromatinzugänglichkeit an regulatorischen Elementen und ist in epigenetische Signalwege eingebunden, die Zellzyklusprogression, DNA-Schadensantworten und linienspezifische Genexpression steuern. Eine verminderte CHD5-Aktivität wird mit gestörter transkriptioneller Kontrolle und chromosomaler Instabilität in Verbindung gebracht, und eine veränderte CHD5-Expression ist häufig mit tumorsuppressiven Netzwerken bei Neuroblastom und anderen malignen Erkrankungen verknüpft. In der biomedizinischen Forschung wird CHD5 intensiv hinsichtlich seiner Funktionen in der Chromatindynamik, der neuronalen Entwicklung und der Frage untersucht, wie epigenetische Fehlregulation zu krankheitsrelevanten Phänotypen beiträgt.

CHD5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CHD5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CHD5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CHD5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CHD5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CHD5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CHD5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CHD5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CHD5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CHD5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.