CHCHD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-425804

Übersicht

Chchd3 kodiert CHCHD3 (auch als Mic19 bekannt), eine zentrale Komponente des mitochondrialen Contact-Site-and-Crista-Organizing-Systems (MICOS), das die Architektur der inneren Mitochondrienmembran und die Integrität der Cristae-Junctions aufrechterhält. Durch das Gerüstbilden von Proteinassemblies an Cristae-Junctions und die Koordination mit der mitochondrialen Dynamik sowie den Proteinimport-Maschinerien unterstützt CHCHD3 die Effizienz der oxidativen Phosphorylierung, die Organisation der Atmungskette und die mitochondriale Qualitätskontrolle. Störungen von MICOS-Komponenten, einschließlich CHCHD3, werden mit veränderter Bioenergetik, erhöhten Mengen reaktiver Sauerstoffspezies und nachgelagerten Auswirkungen auf Apoptose, Mitophagie und zelluläre Stress-Signalwege in Verbindung gebracht. Diese Prozesse werden häufig in Modellen für Neurodegeneration, kardiometabolische Dysfunktion und metabolische Anpassungen von Krebszellen untersucht, in denen mitochondriale Ultrastruktur und Atmung zentrale Phänotypen sind.

Das CHCHD3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Chchd3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Chchd3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Chchd3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CHCHD3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Chchd3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CHCHD3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Chchd3-Exone abzielen, die für die CHCHD3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Chchd3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CHCHD3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CHCHD3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Chchd3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CHCHD3 HDR-Plasmid (m) und CHCHD3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Chchd3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Chchd3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.