CH25H Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419641
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- CH25H El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico CH25H, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CH25H Anticuerpo (1G8): sc-293256
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
CH25H Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419641 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Ch25h codifica la colesterol 25-hidroxilasa (CH25H), una enzima asociada al retículo endoplásmico que convierte el colesterol en 25-hidroxicolesterol, un oxiesterol que modula la composición lipídica de las membranas y el control transcripcional de la homeostasis del colesterol. Mediante la interacción con programas regulados por esteroles, como la señalización de SREBP y receptores nucleares sensibles a oxiesteroles, CH25H influye en el metabolismo lipídico, la señalización inmunitaria innata y la expresión de genes inflamatorios. En modelos murinos, la actividad de Ch25h se ha vinculado con estados de activación de macrófagos, vías de restricción antiviral y la regulación de redes de citocinas. La producción desregulada de oxiesteroles es relevante en estudios de inflamación metabólica y remodelado tisular mediado por el sistema inmunitario, donde las alteraciones en el manejo del colesterol pueden moldear las respuestas de estrés celular y las salidas de señalización.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO CH25H (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ch25h en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ch25h junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ch25h tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CH25H.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ch25h para la investigación de la señalización de CH25H, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Ch25h críticos para la función de CH25H
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ch25h para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido CH25H CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CH25H CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ch25h. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CH25H (m) y el plásmido HDR CH25H (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ch25h para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ch25h definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.