Plasmide CRISPR/Cas9 KO CH25H (m): sc-419641

Présentation

Ch25h code la cholestérol 25-hydroxylase (CH25H), une enzyme associée au réticulum endoplasmique qui convertit le cholestérol en 25-hydroxycholestérol, un oxystérol modulant la composition lipidique des membranes et le contrôle transcriptionnel de l’homéostasie du cholestérol. Par des interactions croisées avec des programmes régulés par les stérols, tels que la signalisation SREBP, et avec des récepteurs nucléaires sensibles aux oxystérols, CH25H influence le métabolisme lipidique, la signalisation de l’immunité innée et l’expression de gènes inflammatoires. Dans des modèles murins, l’activité de Ch25h a été associée aux états d’activation des macrophages, aux voies de restriction antivirale et à la régulation de réseaux de cytokines. Une production d’oxystérols dérégulée est pertinente dans les études sur l’inflammation métabolique et le remodelage tissulaire médié par l’immunité, où une altération de la gestion du cholestérol peut façonner les réponses cellulaires au stress et les sorties de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CH25H (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ch25h dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ch25h, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ch25h à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CH25H.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ch25h pour l'étude de la signalisation de CH25H, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ch25h essentiels à la fonction de CH25H
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ch25h pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CH25H plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CH25H plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ch25h. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CH25H plasmide HDR (m) et le CH25H (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ch25h pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ch25h définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.