Plásmido CRISPR de Activación (h) CGRP2: sc-401165-ACT

El gen humano **CALCB** codifica el péptido relacionado con el gen de la calcitonina 2 (**CGRP2**), un neuropéptido derivado de la familia génica de la calcitonina que señaliza a través del complejo receptor de CGRP (CALCRL junto con RAMP1) para regular vías dependientes de **cAMP**. CGRP2 contribuye a la comunicación neurovascular al modular la vasodilatación, el tono vascular y la señalización neurogénica inflamatoria, y puede influir en las respuestas del músculo liso y de las células inmunitarias en tejidos periféricos. La desregulación de la señalización de la familia CGRP se ha asociado con alteraciones del procesamiento nociceptivo y de la homeostasis vascular, lo que convierte a **CALCB** en un objetivo relevante para estudiar la biología de las neuronas sensoriales, el diálogo cruzado entre endotelio y neuronas, y los mecanismos del dolor inflamatorio. En el cáncer y otras afecciones crónicas, los cambios en la señalización de neuropéptidos pueden moldear el microambiente tisular y las vías de respuesta al estrés, lo que respalda la investigación de **CALCB** en modelos de comunicación célula–célula.

CGRP2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CALCB sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CGRP2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CALCB en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CALCB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CGRP2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CALCB y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CGRP2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CGRP2 en células tumorales con expresión de CALCB silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.