Plasmide CRISPR/Cas9 KO cerberus (h): sc-417362

Présentation

CER1 code la protéine cerberus, un antagoniste sécrété de voies morphogénétiques clés, qui se lie à des membres des familles BMP, NODAL/TGF-β et WNT et les inhibe afin de moduler les gradients de signalisation extracellulaire. Par ces interactions, cerberus contribue aux décisions de mise en place des patrons embryonnaires, notamment la spécification du mésendoderme et le développement neural antérieur, en limitant des programmes transcriptionnels dépendants de SMAD et de la β-caténine. Une expression dérégulée de CER1 a été rapportée dans des contextes impliquant une différenciation aberrante, la transition épithélio-mésenchymateuse et une altération de la signalisation des facteurs de croissance, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des troubles du développement et du remodelage oncogénique des voies de signalisation. En tant que régulateur sécrété, CER1 est également utile pour étudier le contrôle paracrine du destin cellulaire dans des modèles de différenciation de cellules souches et d’organoïdes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO cerberus (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CER1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CER1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CER1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine cerberus.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CER1 pour l'étude de la signalisation de cerberus, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CER1 essentiels à la fonction de cerberus
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CER1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le cerberus plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le cerberus plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CER1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le cerberus plasmide HDR (h) et le cerberus (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CER1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CER1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.