Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
cerberus Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-417362
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- cerberus El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico cerberus, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: cerberus Anticuerpo (C-1): sc-515324
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
cerberus Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-417362 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
CER1 codifica cerberus, un antagonista secretado de vías morfógenas clave que se une e inhibe a miembros de las familias BMP, NODAL/TGF-β y WNT para modular los gradientes de señalización extracelular. A través de estas interacciones, cerberus contribuye a decisiones de patrón durante el desarrollo embrionario, incluida la especificación del mesendodermo y el desarrollo neural anterior, al restringir programas transcripcionales dependientes de SMAD y de β-catenina. Se ha informado de una expresión desregulada de CER1 en contextos que implican diferenciación aberrante, transición epitelio-mesenquimal y señalización alterada de factores de crecimiento, lo que lo hace relevante para estudios de trastornos del desarrollo y de la reconfiguración oncogénica de vías de señalización. Como regulador secretado, CER1 también es útil para investigar el control paracrino del destino celular en la diferenciación de células madre y en modelos de organoides.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO cerberus (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CER1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CER1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CER1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína cerberus.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CER1 para la investigación de la señalización de cerberus, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de CER1 críticos para la función de cerberus
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CER1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido cerberus CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido cerberus CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CER1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR cerberus (h) y el plásmido HDR cerberus (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CER1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CER1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.