Particules Lentivirales d'Activation (h2) CEP192: sc-406971-LAC-2

Le gène humain CEP192 code une protéine d’échafaudage centrosomale essentielle à la maturation du centrosome et à l’activité du centre organisateur des microtubules (MTOC), en coordonnant le recrutement du matériel péricentriolaire et en favorisant l’assemblage correct d’un fuseau bipolaire lors de la mitose. CEP192 intervient dans les voies fondamentales de duplication du centrosome et de contrôle du cycle cellulaire, en interagissant avec des régulateurs tels que PLK1 et AURKA afin de soutenir la nucléation des microtubules et la progression mitotique. La dérégulation ou les mutations de CEP192 ont été associées à l’instabilité chromosomique et à un nombre anormal de centrosomes, des caractéristiques liées à des troubles du développement et à des phénotypes prolifératifs associés au cancer. L’édition génétique de CEP192 permet des études mécanistiques de la biologie du centrosome, de l’intégrité du point de contrôle du fuseau et de la stabilité du génome à l’aide de modèles cellulaires, notamment via l’imagerie en cellules vivantes et la cartographie protéomique des complexes centrosomaux.

Les particules d'activation lentivirales CEP192 (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CEP192 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CEP192 (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CEP192, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CEP192. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CEP192 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.