Plásmido CRISPR de Activación (h) CEP192: sc-406971-ACT

CEP192 (proteína centrosomal 192) es un andamiaje conservado del material pericentriolar que organiza la maduración del centrosoma al reclutar reguladores clave de la nucleación de microtúbulos, incluidos componentes del complejo en anillo de γ-tubulina y quinasas como PLK1 y AURKA. Al coordinar la duplicación de los centríolos, el ensamblaje del huso y la segregación cromosómica precisa, CEP192 favorece una progresión ordenada del ciclo celular durante la mitosis. La alteración o desregulación de la arquitectura del centrosoma y su amplificación, vinculadas a vías dependientes de CEP192, se asocia con frecuencia con inestabilidad cromosómica, aneuploidía y cambios en la capacidad proliferativa en biología del cáncer. Por lo tanto, el CEP192 humano sirve como un nodo útil para estudiar la señalización impulsada por el centrosoma, la dinámica del punto de control mitótico y la organización de los microtúbulos en células en proliferación.

CEP192 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CEP192 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CEP192 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CEP192 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CEP192, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CEP192. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CEP192 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CEP192 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CEP192 en células tumorales con expresión de CEP192 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.