Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
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CEP164 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403550
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- CEP164 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico CEP164, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CEP164 Anticuerpo (E-9): sc-515403
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
CEP164 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-403550 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
CEP164 (proteína centrosomal 164) es un componente de los apéndices distales del centríolo madre, necesario para el inicio del cilio primario y el acoplamiento de vesículas ciliares al cuerpo basal. Funciona como andamiaje para el ensamblaje de los apéndices distales y favorece el reclutamiento de factores de biogénesis ciliar, vinculando la maduración del centrosoma con la ciliogénesis y la regulación del ciclo celular. A través de su papel en el control del eje centrosoma–cilio, CEP164 influye en vías de señalización coordinadas por los cilios primarios, incluidos procesos dependientes de Hedgehog. La desregulación o las mutaciones de CEP164 se asocian con fenotipos de ciliopatía, en particular trastornos relacionados con la nefronoptisis y otras anomalías del desarrollo vinculadas a una función ciliar alterada.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO CEP164 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CEP164 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CEP164 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CEP164 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CEP164.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CEP164 para la investigación de la señalización de CEP164, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de CEP164 críticos para la función de CEP164
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CEP164 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido CEP164 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CEP164 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CEP164. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CEP164 (h) y el plásmido HDR CEP164 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CEP164 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CEP164 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.