Partículas Lentivirales de Activación (h) CENP-F: sc-402178-LAC

CENPF codifica CENP-F, una gran proteína asociada al centrómero y al cinetocoro que se acumula durante la fase G2 tardía y alcanza su máximo en la mitosis para coordinar la alineación cromosómica, la señalización del punto de control del huso y la segregación fiel de las cromátidas hermanas. CENP-F participa en la dinámica de las uniones cinetocoro–microtúbulo y vincula la progresión mitótica con la envoltura nuclear y la organización de los microtúbulos, apoyando transiciones ordenadas del ciclo celular. La expresión alterada de CENPF se asocia con frecuencia a fenotipos proliferativos e inestabilidad cromosómica, lo que la hace relevante para estudios de aneuploidía, mantenimiento del genoma y biología de células tumorales. En células humanas, la perturbación de CENP-F afecta la temporización mitótica y las vías de congresión cromosómica que se investigan comúnmente en la investigación del ciclo celular y del cáncer.

Las partículas de activación lentiviral CENP-F (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CENPF en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral CENP-F (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CENPF, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de CENP-F. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CENPF y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.