CENP-F Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402178

Descripción general

CENPF codifica CENP-F, una gran proteína asociada al cinetocoro que se acumula al final de la fase G2 y durante la mitosis, y coordina la alineación de los cromosomas, la señalización del punto de control del huso y la segregación fiel durante la división celular. CENP-F contribuye a la unión de los microtúbulos en los cinetocoros y respalda la función del centrosoma y la dinámica del huso, lo que la vincula con vías centrales de progresión mitótica y estabilidad del genoma. La desregulación de la expresión o la localización de CENPF se asocia con inestabilidad cromosómica y una capacidad proliferativa alterada, características que se investigan con frecuencia en biología del cáncer. CENP-F también sirve como marcador del estado del ciclo celular y se estudia por sus funciones en la arquitectura nuclear y en las respuestas al estrés mitótico en células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CENP-F (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CENPF en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CENPF junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CENPF tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CENP-F.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CENPF para la investigación de la señalización de CENP-F, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CENPF críticos para la función de CENP-F
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CENPF para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CENP-F CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CENP-F CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CENPF. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CENP-F (h) y el plásmido HDR CENP-F (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CENPF para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CENPF definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.