Plásmido Doble Nickase (h) CENP-C: sc-403000-NIC

CENPC codifica la proteína del centrómero C (CENP‑C), un componente central del cinetocoro interno que se une a la cromatina centromérica y ayuda a organizar la red constitutiva asociada al centrómero necesaria para una unión estable de los microtúbulos. CENP‑C coordina el ensamblaje del cinetocoro y la señalización del punto de control del huso mitótico para garantizar la correcta alineación (congresión) y segregación de los cromosomas durante la mitosis, vinculando la identidad del centrómero con la progresión del ciclo celular. La alteración de la arquitectura del cinetocoro dependiente de CENP‑C contribuye a la mala segregación cromosómica y a la aneuploidía, procesos que se asocian con frecuencia a la inestabilidad genómica en trastornos proliferativos. En consecuencia, CENP‑C se estudia ampliamente en biología del centrómero, fidelidad mitótica y en los mecanismos que acoplan la organización de la cromatina con la herencia cromosómica.

CENP-C El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CENPC en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CENPC. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CENPC. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CENPC alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.