CENP-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401356

概要

CENPBはセントロメアタンパク質B（CENP-B）をコードしており、αサテライト反復配列内のCENP-Bボックスを配列特異的に認識して結合するDNA結合因子で、セントロメアクロマチンの組織化に寄与します。CENP-Bは、有糸分裂期におけるセントロメアの構造維持と高次のヘテロクロマチン形成を支えることで、キネトコアの組み立てと染色体分配に関与します。セントロメアの維持および細胞周期進行における役割を通じて、CENPB機能の変化やセントロメア制御の破綻は、異数性や染色体異常など、さまざまながんで観察されるゲノム不安定性の表現型と関連します。さらにCENP-Bは、抗セントロメア抗体応答における代表的な自己抗原としても確立されており、セントロメア生物学と自己免疫関連の細胞表現型を結び付けています。

CENP-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCENPB遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CENPB内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CENPBのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CENP-Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CENP-Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CENPB欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CENP-Bの機能に不可欠なCENPBエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CENPBゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CENP-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCENP-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CENPB遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CENP-B HDRプラスミド（h）および CENP-B HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCENPBホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCENPB標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。