Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
CENP-B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401356
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- CENP-B El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico CENP-B, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CENP-B Anticuerpo (F-4): sc-376283
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
CENP-B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401356 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
CENPB codifica la proteína centromérica B (CENP-B), un factor de unión al ADN específico de secuencia que reconoce la caja CENP-B dentro de las repeticiones α-satélite y ayuda a organizar la cromatina centromérica. CENP-B contribuye al ensamblaje del cinetocoro y a la segregación cromosómica al sostener la arquitectura del centrómero y la organización de la heterocromatina de orden superior durante la mitosis. A través de sus funciones en el mantenimiento del centrómero y la progresión del ciclo celular, la alteración de la función de CENPB o la desregulación del centrómero es relevante para fenotipos de inestabilidad genómica, incluida la aneuploidía y las aberraciones cromosómicas observadas en diversos cánceres. CENP-B también es un autoantígeno bien establecido en las respuestas de anticuerpos anticentrómero, lo que vincula la biología del centrómero con fenotipos celulares asociados a la autoinmunidad.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO CENP-B (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CENPB en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CENPB junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CENPB tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CENP-B.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CENPB para la investigación de la señalización de CENP-B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de CENPB críticos para la función de CENP-B
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CENPB para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido CENP-B CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CENP-B CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CENPB. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CENP-B (h) y el plásmido HDR CENP-B (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CENPB para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CENPB definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.