Plásmido CRISPR de Activación (h) CEACAM5: sc-401219-ACT

CEACAM5 (molécula 5 de adhesión celular relacionada con el antígeno carcinoembrionario) es una proteína de la superfamilia de las inmunoglobulinas anclada por glicosilfosfatidilinositol (GPI) que se expresa en la superficie apical de las células epiteliales, donde contribuye a la adhesión célula–célula y al mantenimiento de la arquitectura tisular. Mediante interacciones homofílicas y heterofílicas, CEACAM5 puede influir en la diferenciación epitelial, la polaridad y la señalización dependiente del contacto, que se entrecruza con vías dependientes de la adhesión y con la remodelación del glicocálix de la superficie celular. La expresión desregulada de CEACAM5 se asocia con frecuencia a neoplasias epiteliales y se utiliza ampliamente como marcador molecular en estudios de biología tumoral, incluidos la invasión, la metástasis y las interacciones inmunitarias dentro del microambiente tumoral. Su localización en la superficie y su expresión variable según el contexto la convierten en un nodo útil para investigar cambios de estado epitelial y programas de señalización oncogénica.

CEACAM5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CEACAM5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CEACAM5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CEACAM5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CEACAM5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CEACAM5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CEACAM5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CEACAM5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CEACAM5 en células tumorales con expresión de CEACAM5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.