Plasmide CRISPR/Cas9 KO CEACAM1 (h): sc-417666

Présentation

CEACAM1 (molécule d’adhésion cellulaire 1 apparentée à l’antigène carcino-embryonnaire) est une glycoprotéine de surface cellulaire de la superfamille des immunoglobulines, qui médie des interactions d’adhésion homophiles et hétérophiles aux interfaces épithéliales et endothéliales. Via ses motifs cytoplasmiques ITIM, CEACAM1 module une signalisation dépendante des phosphatases, influençant l’activité des voies MAPK et PI3K/AKT, l’organisation du cytosquelette et l’intégrité des jonctions. Elle agit également comme récepteur immunorégulateur sur les leucocytes, en modulant les seuils d’activation et les réponses cytokiniques dans les microenvironnements inflammatoires. Une expression dérégulée de CEACAM1 et un déséquilibre de ses isoformes ont été associés à une altération de la fonction de barrière, à l’échappement immunitaire, au remodelage angiogénique et à des phénotypes de progression dans de nombreuses tumeurs solides et maladies inflammatoires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CEACAM1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CEACAM1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CEACAM1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CEACAM1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CEACAM1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CEACAM1 pour l'étude de la signalisation de CEACAM1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CEACAM1 essentiels à la fonction de CEACAM1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CEACAM1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CEACAM1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CEACAM1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CEACAM1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CEACAM1 plasmide HDR (h) et le CEACAM1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CEACAM1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CEACAM1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.