Particules Lentivirales d'Activation (h) Cdx1: sc-402522-LAC

Le gène humain CDX1 code le facteur de transcription à homéoboîte Cdx1, un régulateur de la mise en place des axes antéro-postérieurs et de la différenciation de l’épithélium intestinal. Cdx1 intègre des signaux de développement, notamment les voies Wnt/β-caténine et celles liées aux BMP, afin de contrôler des programmes transcriptionnels régissant la prolifération, la spécification des lignages et le maintien de l’identité intestinale. Une expression altérée de CDX1 a été associée à une maturation épithéliale dysrégulée et à la métaplasie intestinale, et ce gène est fréquemment étudié dans le contexte de la biologie tumorale colorectale et des mécanismes des maladies de la muqueuse. En tant que régulateur transcriptionnel se liant à l’ADN, Cdx1 constitue un point d’entrée pertinent pour disséquer les réseaux de régulation génique qui façonnent le destin épithélial et les fonctions associées à la barrière.

Les particules d'activation lentivirales Cdx1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CDX1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Cdx1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CDX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Cdx1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CDX1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.