CDKN2C/p18 INK4c CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401214

Übersicht

CDKN2C kodiert p18^INK4c, ein Mitglied der INK4-Familie cyclinabhängiger Kinaseinhibitoren, das an CDK4 und CDK6 bindet, um die durch Cyclin D getriebene Phosphorylierung von RB zu begrenzen und den G1/S-Kontrollpunkt durchzusetzen. Durch die Einschränkung E2F-abhängiger Transkriptionsprogramme trägt CDKN2C zur Kontrolle der Zellzyklusprogression, der Linienfestlegung und der zellulären Quieszenz in zahlreichen Geweben bei. Störungen der CDKN2C-Funktion werden häufig im Kontext einer dysregulierten CDK4/6–RB-Signalübertragung, genomischer Instabilität und proliferativer Phänotypen untersucht, die für die Krebsbiologie relevant sind. CDKN2C wird zudem als mechanistischer Knotenpunkt genutzt, um mitogene Signaleingänge mit der Integrität von Kontrollpunkten in Modellen onkogenen Stresses zu verknüpfen.

Das CDKN2C/p18 INK4c CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CDKN2C-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CDKN2C-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CDKN2C nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CDKN2C/p18 INK4c-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CDKN2C-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CDKN2C/p18 INK4c-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CDKN2C-Exone abzielen, die für die CDKN2C/p18 INK4c-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CDKN2C-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CDKN2C/p18 INK4c CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CDKN2C/p18 INK4c CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CDKN2C-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CDKN2C/p18 INK4c HDR-Plasmid (h) und CDKN2C/p18 INK4c HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CDKN2C-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CDKN2C-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.