Plásmido Doble Nickase (h) CDKN2B/p15 INK4B: sc-400570-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CDKN2B/p15 INK4B consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CDKN2B/p15 INK4B (h) y el plásmido de doble nickasa CDKN2B/p15 INK4B (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CDKN2B. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CDKN2B/p15 INK4B Anticuerpo (D-12): sc-271791
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CDKN2B/p15 INK4B | sc-400570-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CDKN2B/p15 INK4B | sc-400570-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDKN2B codifica p15^INK4B, un inhibidor de quinasas dependientes de ciclina que se une a CDK4/6 para frenar la fosforilación de RB y hacer cumplir el punto de control G1/S. Como nodo central del control del ciclo celular, CDKN2B integra señales de vías antiproliferativas como TGF-β/SMAD y programas más amplios de senescencia que limitan la proliferación inapropiada. La regulación alterada de CDKN2B, incluida la deleción, la metilación del promotor o la disrupción del locus en 9p21, se asocia con frecuencia a la pérdida del control del crecimiento en diversas neoplasias y a fenotipos vinculados a una proliferación aberrante. Esta biología convierte a CDKN2B en una diana útil para estudiar el cumplimiento de puntos de control, la evasión de la senescencia y las interacciones entre vías que convergen en la señalización CDK4/6–RB.
CDKN2B/p15 INK4B El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CDKN2B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CDKN2B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CDKN2B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CDKN2B alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.