Plasmide CRISPR/Cas9 KO CDKN2B/p15 INK4B (h2): sc-400570-KO-2

Présentation

CDKN2B code p15^INK4B, un inhibiteur des kinases dépendantes des cyclines qui se lie à CDK4/6 afin de limiter la phosphorylation de RB dépendante de la cycline D et d’imposer le point de contrôle G1/S. Son expression est fréquemment induite par des signaux antiprolifératifs tels que la voie TGF-β, reliant le stress extracellulaire et les programmes de différenciation à l’arrêt du cycle cellulaire et à la sénescence. CDKN2B est situé dans le locus 9p21, une région génomique souvent altérée dans les cancers et impliquée dans la susceptibilité à divers traits liés au vieillissement ainsi qu’à des caractéristiques cardiométaboliques. La dérégulation du contrôle de CDK4/6 médié par p15^INK4B contribue à une prolifération aberrante, à une modification de l’engagement de lignée et à l’échappement aux voies inhibitrices de la croissance.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CDKN2B/p15 INK4B (h2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CDKN2B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CDKN2B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CDKN2B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CDKN2B/p15 INK4B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CDKN2B pour l'étude de la signalisation de CDKN2B/p15 INK4B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CDKN2B essentiels à la fonction de CDKN2B/p15 INK4B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CDKN2B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CDKN2B/p15 INK4B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CDKN2B/p15 INK4B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CDKN2B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CDKN2B/p15 INK4B plasmide HDR (h) et le CDKN2B/p15 INK4B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CDKN2B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CDKN2B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.