Plásmido Doble Nickase (m) CDKN2A/p16: sc-419610-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)CDKN2A/p16 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CDKN2A/p16 (m) y el plásmido de doble nickasa CDKN2A/p16 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Cdkn2a. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CDKN2A/p19ARF Anticuerpo (5-C3-1): sc-32748
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) CDKN2A/p16 | sc-419610-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) CDKN2A/p16 | sc-419610-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Cdkn2a del ratón codifica CDKN2A/p16, un inhibidor de quinasas dependientes de ciclina que restringe la actividad de CDK4/6 y ayuda a mantener el control del punto de control G1/S del ciclo celular dependiente de RB. Al limitar la fosforilación de las proteínas de la familia RB, p16 coordina programas de detención proliferativa y se integra con la señalización asociada a la senescencia en respuesta al estrés oncogénico y al daño tisular. La regulación de Cdkn2a está estrechamente vinculada a vías que gobiernan el envejecimiento celular, la proliferación de células madre y progenitoras, y la integridad de los puntos de control. La expresión o función alteradas de Cdkn2a/p16 se utilizan ampliamente como lectura molecular de la senescencia, de la activación de vías supresoras de tumores y de la desregulación del ciclo celular en modelos murinos.
CDKN2A/p16 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Cdkn2a en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Cdkn2a. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Cdkn2a. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Cdkn2a alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.