Plásmido Doble Nickase (h) Cdk9: sc-400242-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Cdk9 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Cdk9 (h) y el plásmido de doble nickasa Cdk9 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CDK9. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Cdk9 Anticuerpo (D-7): sc-13130
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Cdk9 | sc-400242-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Cdk9 | sc-400242-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDK9 codifica la subunidad catalítica del factor de elongación transcripcional positivo b (P-TEFb), un complejo quinasa que fosforila el dominio C-terminal de la ARN polimerasa II y los factores de pausa para promover una elongación transcripcional productiva. Mediante el control de la liberación de la pausa proximal al promotor, Cdk9 regula programas génicos de respuesta rápida, la progresión del ciclo celular y la transcripción adaptativa al estrés, e integra señales dependientes de ciclina T con redes reguladoras asociadas a la cromatina. La desregulación de la actividad de CDK9 o la dependencia de ella se ha vinculado con una homeostasis transcripcional alterada en cáncer y con perturbaciones en circuitos transcripcionales inflamatorios y virales, lo que lo convierte en un nodo central para estudiar los mecanismos de control de la transcripción.
Cdk9 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CDK9 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CDK9. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CDK9. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CDK9 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.