Plásmido CRISPR de Activación (h) Cdk9: sc-400242-ACT

El CDK9 humano codifica la quinasa dependiente de ciclina 9 (Cdk9), la subunidad catalítica del factor positivo de elongación de la transcripción b (P-TEFb), que fosforila el dominio C-terminal de la ARN polimerasa II para promover una elongación transcripcional productiva. Mediante la regulación de la liberación de la pausa proximal al promotor, Cdk9 coordina la expresión de genes de respuesta inmediata, programas de respuesta al estrés y reguladores del ciclo celular y de la supervivencia, e integra señales de coactivadores transcripcionales y factores asociados a la cromatina. La actividad de CDK9 influye en el procesamiento del ARN y la estabilidad del genoma al moldear eventos acoplados a la transcripción y controlar la cinética de la expresión génica. La señalización desregulada de CDK9/P-TEFb se asocia con frecuencia con dependencias transcripcionales aberrantes relevantes para la biología del cáncer, la señalización inflamatoria y el control transcripcional virus–huésped, lo que la convierte en un nodo ampliamente utilizado para estudios mecanísticos de la transcripción.

Cdk9 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CDK9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Cdk9 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CDK9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CDK9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cdk9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CDK9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cdk9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cdk9 en células tumorales con expresión de CDK9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.