Cdk6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400309

Panoramica

CDK6 codifica la chinasi ciclina-dipendente 6 (Cdk6), una chinasi serina/treonina che si associa alle cicline di tipo D per fosforilare le proteine della famiglia RB e promuovere la progressione del ciclo cellulare dalla fase G1 alla fase S. L’attività di Cdk6 integra i segnali mitogenici con il controllo dei checkpoint attraverso l’asse ciclina D–CDK4/6–RB–E2F e interagisce con vie che regolano proliferazione, differenziamento e senescenza. Un’espressione o una segnalazione di CDK6 deregolata è spesso associata a un controllo aberrante del ciclo cellulare nel cancro ed è inoltre implicata nelle decisioni di destino delle linee ematopoietiche e in programmi trascrizionali infiammatori. Per il suo ruolo centrale nel coordinare l’ingresso nel ciclo cellulare, CDK6 è ampiamente studiato, a livello di pathway, nella biologia dei tumori, nella regolazione di cellule staminali/progenitrici e nei meccanismi di resistenza alle terapie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Cdk6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CDK6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CDK6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CDK6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Cdk6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CDK6 per lo studio della segnalazione di Cdk6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CDK6 critici per la funzione di Cdk6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CDK6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Cdk6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Cdk6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CDK6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Cdk6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Cdk6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CDK6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CDK6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.