Plasmide CRISPR/Cas9 KO Cdk4 (h): sc-400148

Présentation

CDK4 code la kinase dépendante des cyclines 4 (Cdk4), un régulateur central de la phase G1 qui s’associe aux cyclines de type D pour phosphoryler les protéines de la famille RB et favoriser la transcription dépendante d’E2F, nécessaire à l’entrée en phase S. L’activité de Cdk4 est contrôlée par les signaux mitogènes et par des inhibiteurs des CDK tels que CDKN2A/p16, intégrant les signaux des voies MAPK/ERK et PI3K–AKT dans l’engagement du cycle cellulaire. La dérégulation de l’axe CDK4–cycline D–RB est fréquemment associée à une prolifération aberrante et à une altération du contrôle des points de contrôle dans des contextes de biologie tumorale et du développement. En tant que kinase nodale du cycle cellulaire, CDK4 est couramment étudiée pour ses rôles dans la prolifération, la sénescence, la spécification de lignée et les réponses au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Cdk4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CDK4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CDK4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CDK4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Cdk4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CDK4 pour l'étude de la signalisation de Cdk4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CDK4 essentiels à la fonction de Cdk4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CDK4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Cdk4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Cdk4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CDK4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Cdk4 plasmide HDR (h) et le Cdk4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CDK4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CDK4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.