Partículas Lentivirales de Activación (h) Cdc42EP4: sc-408523-LAC

CDC42EP4 codifica Cdc42EP4, una proteína efectora de Cdc42 de la familia Borg/CEP que acopla la señalización de las GTPasas Rho a la remodelación del citoesqueleto de actina y septinas. Al coordinar la organización de filamentos y las estructuras contráctiles, Cdc42EP4 contribuye al control de la forma celular, la adhesión, la polaridad y los programas de migración, que son centrales para la morfogénesis tisular y la mecanobiología celular. Las salidas desreguladas de la vía de CDC42 y la reorganización del citoesqueleto se implican con frecuencia en el comportamiento invasivo, las interacciones alteradas con el estroma y otros fenotipos relevantes para la investigación en cáncer y enfermedades inflamatorias. Como nodo de lectura aguas abajo de Cdc42, Cdc42EP4 proporciona una herramienta abordable para analizar la arquitectura del citoesqueleto y los cambios en la motilidad dependientes de señales.

Las partículas de activación lentiviral Cdc42EP4 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CDC42EP4 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Cdc42EP4 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CDC42EP4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Cdc42EP4. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CDC42EP4 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.