Plásmido CRISPR de Activación (h) CDC42: sc-418353-ACT

CDC42 codifica una pequeña GTPasa de la familia Rho, expresada de forma ubicua, que actúa como un interruptor molecular que controla la remodelación del citoesqueleto de actina, la polaridad celular, el tráfico vesicular y la progresión del ciclo celular. Al alternar entre los estados unidos a GDP y a GTP, CDC42 coordina la señalización a través de efectores como las PAK, WASP/N-WASP y el complejo de polaridad PAR, conectando las señales de receptores con la dinámica del citoesqueleto y los programas transcripcionales. La actividad de CDC42 se integra con vías como PI3K–AKT, MAPK y la adhesión mediada por integrinas para regular la migración, la endocitosis y la integridad de las uniones celulares. La señalización desregulada de CDC42 se ha asociado con alteraciones en la función de células inmunitarias, anomalías del neurodesarrollo y fenotipos oncogénicos caracterizados por motilidad e invasión aberrantes.

CDC42 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CDC42 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CDC42 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CDC42 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CDC42, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CDC42. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CDC42 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CDC42 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CDC42 en células tumorales con expresión de CDC42 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.