Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) Cdc27: sc-400789-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Cdc27 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Cdc27 (h) y el plásmido de doble nickasa Cdc27 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CDC27. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Cdc27 Anticuerpo (AF3.1): sc-9972
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Cdc27 | sc-400789-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Cdc27 | sc-400789-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano **CDC27** codifica Cdc27, una subunidad central con repeticiones tetratricopeptídicas (TPR) del complejo promotor de la anafase/ciclosoma (APC/C), una ligasa E3 de ubiquitina que controla la proteólisis ordenada de reguladores mitóticos clave. Al favorecer el ensamblaje del APC/C y las interacciones con coactivadores, Cdc27 contribuye a la transición oportuna de metafase a anafase, la salida de mitosis y el mantenimiento de la estabilidad genómica mediante la degradación regulada de ciclinas y securina. Por lo tanto, la función de CDC27 está estrechamente vinculada a la progresión del ciclo celular, la señalización del punto de control del huso y la proteostasis mediada por ubiquitina. La actividad alterada del APC/C y la desregulación de CDC27 se han asociado con inestabilidad cromosómica y fenotipos proliferativos estudiados en biología del cáncer y trastornos relacionados del ciclo celular.
Cdc27 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CDC27 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CDC27. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CDC27. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CDC27 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.