Cdc25B Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401457-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Cdc25BO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Cdc25B (h) e o Plasmídeo Double Nickase Cdc25B (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para CDC25B. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Cdc25B Anticorpo (DCS-162): sc-56266
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Cdc25B Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-401457-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cdc25B Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-401457-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDC25B codifica a fosfatase de dupla especificidade Cdc25B, um ativador essencial de quinases dependentes de ciclina que promove a progressão do ciclo celular ao remover fosfatos inibitórios de CDK1 e CDK2. Ao coordenar a transição G2/M e integrar sinais de checkpoint a jusante de vias de sinalização de dano ao DNA, como ATM/ATR, a Cdc25B ajuda a regular a entrada em mitose e as respostas ao estresse replicativo. Sua atividade é controlada por localização dependente de fosforilação e pela estabilidade proteica, conectando-a à sinalização por MAPK e à degradação proteassomal. A expressão ou atividade desregulada de CDC25B está associada à proliferação aberrante, instabilidade cromossômica e desregulação oncogênica do ciclo celular, tornando-a um alvo frequente em estudos de biologia tumoral.
Cdc25B O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CDC25B em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CDC25B. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CDC25B. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CDC25B interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.