Plasmide CRISPR d'Activation (h) Cdc20: sc-400583-ACT

Le gène humain **CDC20** code Cdc20, un coactivateur essentiel du complexe promoteur de l’anaphase/cyclosome (**APC/C**) qui contrôle la transition de la métaphase vers l’anaphase en favorisant la dégradation, médiée par l’ubiquitine, de régulateurs mitotiques clés, notamment la sécurine et la cycline B. Cdc20 intègre les signaux du point de contrôle d’assemblage du fuseau (spindle assembly checkpoint) via des interactions avec **MAD2**, **BUBR1** et **BUB3**, afin d’assurer une ségrégation chromosomique fidèle et de maintenir la stabilité génomique. Une expression dérégulée de **CDC20** ou le contournement du point de contrôle peut contribuer à l’instabilité chromosomique et à une prolifération aberrante, ce qui en fait une cible fréquemment étudiée dans les voies de contrôle du cycle cellulaire et de la fidélité mitotique. Les études centrées sur **CDC20** sont largement utilisées pour analyser la dynamique de l’APC/C, la protéostasie au cours de la mitose et les mécanismes reliant les erreurs mitotiques aux phénotypes d’instabilité génomique.

Cdc20 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDC20 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Cdc20 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDC20 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDC20, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Cdc20. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDC20 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Cdc20 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Cdc20 dans les cellules tumorales présentant une expression de CDC20 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.