Plásmido CRISPR de Activación (h) CD89: sc-403014-ACT

FCAR codifica CD89 (FcαRI), un receptor Fc de la inmunoglobulina A (IgA) expresado principalmente en células mieloides como neutrófilos, monocitos, macrófagos y eosinófilos. La unión de CD89 a complejos inmunes de IgA desencadena una señalización dependiente de la cadena γ de los FcR mediante la fosforilación de ITAM, activando SYK, PI3K, MAPK y programas efectores inflamatorios y antimicrobianos posteriores, incluidos la fagocitosis, la desgranulación, la liberación de citocinas y la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos. Al modular la inmunidad mediada por IgA a nivel mucoso y sistémico, FCAR influye en la comunicación entre la inmunidad innata y adaptativa y en el manejo de complejos inmunes. La señalización desregulada de CD89 y los cambios en la expresión del receptor se han vinculado con patología inflamatoria y autoinmunitaria, incluida la nefropatía por IgA y otras enfermedades impulsadas por complejos inmunes, lo que respalda su relevancia para estudios de inmunología mecanística.

CD89 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FCAR sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD89 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FCAR en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FCAR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD89. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FCAR y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD89 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD89 en células tumorales con expresión de FCAR silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.