Plásmido CRISPR de Activación (h2) CD81: sc-400185-ACT-2

El CD81 humano codifica una proteína tetraspanina de superficie celular que organiza microdominios de membrana y regula el agrupamiento de receptores, la adhesión y la transducción de señales en células inmunes y no inmunes. CD81 participa en la función del correceptor de las células B junto con CD19/CD21, modula el tráfico dependiente de integrinas e influye en vías que controlan la presentación de antígenos, la activación celular y la biogénesis de vesículas/exosomas. La expresión o compartimentalización desregulada de CD81 se ha vinculado con alteraciones de la señalización inmunitaria y del comportamiento de células tumorales, lo que respalda su uso como marcador y como nodo mecanístico en investigación en inmunología y oncología. CD81 se utiliza ampliamente en estudios de complejos de proteínas de membrana, en la caracterización de vesículas extracelulares y en investigaciones de interacciones patógeno–hospedador, donde las redes de tetraspaninas gobiernan la entrada y la propagación de célula a célula.

CD81 El plásmido de activación CRISPR (h2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD81 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD81 El plásmido de activación CRISPR (h2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD81 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD81, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD81. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD81 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD81 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD81 en células tumorales con expresión de CD81 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.